Genética aplicada, ingeniería genética y biotecnología
El examen pide describir técnicas concretas y ordenar sus pasos: cortar, unir, introducir, seleccionar. También se valore entender qué es un OMG, qué información da una huella genética y qué límites éticos se plantean.
Herramientas básicas
- Enzimas de restricción: cortan ADN en secuencias palindrómicas y generan extremos cohesivos o romos (EcoRI deja extremos cohesivos).
- ADN ligasa: une fragmentos covalentemente el enlace fosfodiéster.
- Vectores: plásmidos, fagos o cósmidos; llevan origen de replicación, marcador de selección (resistencia a antibiótico) y sitios de restricción.
- PCR: multiplica ADN in vitro con cebadores específicos, desnaturalización, hibridación y extensión por ADN polimerasa termoestable (Taq).
- Electroforesis en gel de agarosa: separa fragmentos por tamaño; los menores migran más lejos.
- Secuenciación de Sanger (didodesoxi) y secuenciación masiva; CRISPR-Cas9 para edición dirigida.
Ejemplo resuelto: clonar el gen de la insulina humana en una bacteria
Razonamiento paso a paso: (1) obtener ADN del gen (ADNc a partir de ARNm maduro, para evitar intrones que la bacteria no procesa); (2) cortar el ADNc y el plásmido con la misma enzima de restricción para generar extremos compatibles; (3) ligar con ADN ligasa; (4) transformar bacterias (choque térmico o electroporación) y seleccionar en medio con antibiótico, buscando las que perdieron la resistencia asociada a la inserción; (5) comprobar la presencia del gen por PCR o secuenciación; (6) cultivar y purificar la proteína. La bacteria no glucosila igual que la célula humana, por lo que a veces se usa levadura o cultivo celular.
Errores que cuestan puntos
- Decir que la PCR usa ligasa o que amplifica proteínas.
- Olvidar que en bacterias no funciona el splicing y hay que partir de ADNc.
- Confundir huella genética (repeticiones en tándem, identificación individual) con secuenciación de un gen.
- Ignorar la cuestión bioética cuando se pregunta por OMG o terapia génica.