Controllo qualità Bradford: accettare o ripetere il lotto?
Nel laboratorio di biotecnologie si controlla un lotto di concentrato proteico di siero. La retta di taratura Bradford, ottenuta con standard 0–1.000 µg/mL, è y = 0,00085·C + 0,012 (y = assorbanza, C = µg/mL; R² = 0,998). Il campione è diluito 1:10 e letto in triplicato: assorbanze 0,435; 0,441; 0,402. Il bianco è 0,008. Il capitolato accetta concentrazioni tra 4,50 e 5,20 mg/mL e un CV tra replicati ≤ 5%. Il lotto è pronto per la spedizione; il responsabile chiede se firmare il certificato di analisi o ripetere la misura. Un tecnico suggerisce di scartare il valore 0,402 perché «troppo basso», ma non c'è evidenza di errore sperimentale. La bilancia è stata tarata il giorno prima; la cuvetta usata per il terzo replicato presenta una piccola riga.
1. Calcola la concentrazione media del lotto e il CV campionario. Il lotto rispetta i criteri? Motiva con i passaggi.
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Con y = 0,00085C + 0,012, C = (y − 0,012)/0,00085. Replicati: (0,435−0,012)/0,00085 = 497,6 µg/mL; (0,441−0,012)/0,00085 = 504,7; (0,402−0,012)/0,00085 = 458,8. Moltiplicando per la diluizione 1:10: 4,976; 5,047; 4,588 mg/mL. Media = 4,870 mg/mL. Deviazione standard campionaria: scarti 0,106; 0,177; −0,282; somma quadrati 0,122; varianza 0,061; s = 0,247; CV = 0,247/4,870 × 100 = 5,07%. La media è dentro 4,50–5,20 mg/mL, ma il CV supera di poco il 5%. Quindi il lotto non è automaticamente accettabile: il criterio di precisione non è rispettato.
2. Il tecnico vuole eliminare il dato 0,402. Valuta se è corretto e proponi un piano di azione prima di firmare il certificato.
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Eliminare 0,402 senza una causa documentata è scorretto: sarebbe una pulizia dei dati a posteriori. La cuvetta con una riga è un sospetto concreto, ma va verificato. Piano: 1) ripetere il terzo replicato con cuvetta pulita e bianco fresco; 2) se il nuovo valore rientra e il CV scende ≤5%, rifare il calcolo con i tre dati validi e firmare; 3) se resta anomalo, ripetere l'intera tripletta e controllare diluizione e retta; 4) registrare l'evento nel quaderno di laboratorio. Solo dopo si può accettare o respingere il lotto.