Biología celular, genética e ingeniería genética
Aquí se evalúan la estructura y el ciclo celular, la señalización, la genética mendeliana y molecular, y las herramientas de ingeniería genética: enzimas de restricción, vectores, selección y edición con CRISPR-Cas9.
Reglas y conceptos clave
- La replicación del DNA es semiconservadora; la meiosis genera recombinación y variación genética.
- En un cruzamiento prueba, la frecuencia de recombinación (FR) estima la distancia genética: 1 cM = 1% de recombinantes.
- Un plásmido requiere origen de replicación, marcador seleccionable y sitio de clonación; el promotor define la expresión.
- CRISPR-Cas9 corta el DNA guiado por un sgRNA; NHEJ produce indels (knockout) y HDR permite insertar una secuencia deseada.
- La selección con antibiótico no prueba que el inserto esté presente; se confirma con PCR de colonia o secuenciación.
Ejemplo trabajado
En un cruzamiento prueba AaBb × aabb se obtienen 42, 38, 10 y 10 descendientes. Los parentales son las clases mayoritarias (42 + 38 = 80) y los recombinantes las minoritarias (10 + 10 = 20). FR = 20/100 = 0.20 = 20%, por lo que los genes están ligados a 20 cM. El razonamiento: si fueran independientes, los cuatro fenotipos serían ~25% cada uno; la desviación hacia dos clases mayoritarias indica ligamiento. Una FR de 50% no distingue ligamiento de independencia.
Errores que cuestan puntos
Confundir cM con porcentaje de individuos; suponer que el alelo dominante es el más frecuente en la población; tratar la distancia genética como distancia física; creer que Cas9 corta sin guía; y olvidar que la selección por antibiótico solo indica presencia del plásmido, no del inserto.