Metodologie analitiche, strumentazione e sicurezza in laboratorio
Il dominio valuta la scelta del metodo analitico, il calcolo dei risultati e la gestione del rischio. Le tracce tipiche chiedono di correggere un dato per la diluizione o di motivare una scelta strumentale.
Spettrofotometria e quantificazione
Legge di Beer-Lambert: A = ε × b × c, con b in cm; la relazione è lineare solo in un intervallo di concentrazioni e va costruita una retta di taratura con standard e bianco. La fluorimetria è più sensibile ma meno robusta; HPLC e GC separano per affinità e volatilità, con identificazione basata sul tempo di ritenzione e conferma per spettrometria di massa.
Separazioni
Centrifugazione: il confronto tra protocolli si fa in RCF, non in rpm, con RCF = 1,118 × 10⁻⁵ × r(mm) × rpm². Elettroforesi in agarosio per acidi nucleici, SDS-PAGE per proteine secondo il peso molecolare.
Sicurezza
D.Lgs 81/2008: valutazione del rischio, DPI, cappa chimica, schede di sicurezza, separazione di acidi e basi, stoccaggio di infiammabili in armadi dedicati, smaltimento differenziato dei rifiuti chimici e biologici. Il rischio biologico richiede contenimento secondo il livello del microrganismo.
Esempio guidato
Un campione diluito 1:100 dà A = 0,45 in cuvetta da 1 cm, con ε = 15.000 M⁻¹cm⁻¹. c = A/(ε × b) = 0,45/15.000 = 3 × 10⁻⁵ M nella cuvetta; moltiplicando per il fattore di diluizione, la concentrazione nel campione originale è 3 × 10⁻³ M. Dimenticare il fattore di diluizione è l'errore più comune.
Errori che costano punti
Confrontare protocolli espressi in rpm; attribuire alla spettrofotometria l'identificazione certa di un composto senza standard; conservare insieme acidi e basi; usare un unico punto di taratura fuori dall'intervallo di linearità.