Diagnóstico por PCR-RFLP en una familia
Una pareja acude a consejo genético porque su primer hijo padece una enfermedad autosómica recesiva. Se amplifica por PCR un fragmento de 600 pb del gen implicado. El alelo normal tiene una diana para la enzima de restricción EcoRI que genera fragmentos de 400 y 200 pb; el alelo mutante pierde esa diana y permanece en 600 pb. En la electroforesis, el padre muestra bandas de 600, 400 y 200 pb; la madre, 600, 400 y 200 pb; el hijo enfermo, solo 600 pb; la hija sana, 400 y 200 pb. La pareja espera otro hijo y se analiza el ADN fetal: muestra 600, 400 y 200 pb. No hay historia de enfermedad en las familias de ambos progenitores. El estudio se repitió dos veces con el mismo resultado.
1. Asigna el genotipo de cada miembro de la familia y explica por qué el hijo enfermo solo presenta la banda de 600 pb.
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Llamamos N al alelo normal y m al mutante. El alelo N produce 400 + 200 pb; el alelo m produce 600 pb. Por tanto: quien solo tiene 600 pb es mm; quien solo tiene 400 + 200 pb es NN; quien tiene 600 + 400 + 200 pb es Nm.
Padre: Nm. Madre: Nm. Hijo enfermo: mm. Hija sana: NN. El hijo enfermo solo muestra 600 pb porque ambos alelos carecen de la diana de EcoRI y el fragmento no se corta. La hija sana es homocigota normal porque ambos alelos se cortan completamente. Los progenitores son portadores sanos y transmitieron el alelo m al hijo enfermo.
2. Calcula la probabilidad de que el feto padezca la enfermedad y la de que sea portador. ¿Coincide con el riesgo teórico antes del análisis?
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El feto muestra 600, 400 y 200 pb, luego es heterocigoto Nm: portador. Según este resultado, la probabilidad de que padezca la enfermedad es 0 % y la de que sea portador es 100 %.
Antes del análisis, como ambos progenitores son Nm, el riesgo teórico era 25 % de afectado (mm), 50 % de portador (Nm) y 25 % de sano no portador (NN). El resultado fetal modifica la probabilidad condicionada: al ser Nm, no está afectado. No obstante, hay que confirmar que la digestión fue completa y que no hay contaminación materna; si la banda de 600 pb fuera muy tenue, podría tratarse de un artefacto y convendría repetir o usar otra técnica.
3. La hija sana desea tener hijos con una pareja portadora. ¿Qué riesgo tendría su descendencia? ¿Qué habría que confirmar antes de aconsejar?
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La hija sana es NN según la electroforesis, así que con una pareja portadora (Nm) todos sus hijos recibirían N de ella: 0 % de afectados y 50 % de portadores (Nm), suponiendo que el padre sea realmente Nm. El riesgo no es el mismo que el de la pareja inicial, porque ella no puede transmitir el alelo m.
Antes de aconsejar hay que confirmar su genotipo con una segunda técnica o repetir la PCR-RFLP, descartar mosaicismo germinal y comprobar que la pareja es portadora. Si el compañero no fuera portador, el riesgo sería aún menor. También conviene explicar que el consejo se basa en el genotipo y no solo en el fenotipo.